目的:研究小鸡形觉剥夺性近视恢复眼(RFDM)后极部巩膜基质金属蛋白酶2(MMP-2)基因表达以揭示FDM形成的可能机制。
方法:1 d龄来亨雏鸡随机分为形觉剥夺性近视眼(FDM)组、RFDM组、自身对照组与正常对照组。以半透明塑料眼罩分别单眼遮盖4、7、14、21、30 d以制备小鸡FDM动物模型(FDM组),当遮盖7、21 d时随机选取小鸡分别去遮盖1、4 d以制备RFDM动物模型(RFDM组);上述实验小鸡对侧眼作为各组自身对照眼(自身对照组);同时随机选取同龄、非遮盖小鸡作为各组的正常对照组。上述各实验组每组小鸡15只。于各预定实验时间去头法处死小鸡,取后极部巩膜,采用明胶酶谱法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)一步法、免疫组化法分别检测上述各组小鸡后极部巩膜明胶酶活性、MMP-2 mRNA及蛋白质表达。
结果:各FDM组小鸡后极部巩膜MMP-2酶活性(约62 kDa)与mRNA水平显著增高,且呈明显时间依赖性,与相应自身对照组、正常对照组比较差别均有统计学意义(P<0.01);遮盖7 d后去遮盖1 d 小鸡后极部巩膜MMP-2酶活性、mRNA表达明显下调,去遮盖4 d后恢复至其正常对照组、自身对照组水平(P>0.05);遮盖21 d后去遮盖1 d小鸡后极部巩膜MMP-2酶活性、mRNA表达亦下调,去遮盖4 d后尽管显著降低,但仍明显高于其正常对照组、自身对照组水平(P<0.01)。免疫组化结果与上述改变基本一致,正常对照组、自身对照组后极部巩膜仅少量成纤维细胞胞浆、软骨细胞软骨囊与细胞膜呈现MMP-2阳性染色;FDM组阳性染色细胞明显增多,尤其以双核细胞、不规则细胞染色最明显,同时部分细胞外间质(ECM)亦出现阳性表达;而遮盖7 d后去遮盖4 d组与其正常对照组、自身对照组基本相似,遮盖21 d后去遮盖4 d组MMP-2阳性染色虽然较遮盖21 d组减少,但仍较自身对照组、正常对照组明显,小部分ECM亦可见阳性表达颗粒。
结论:形觉剥夺可明显促进小鸡后极部巩膜MMP-2酶活性、mRNA及蛋白质表达,去遮盖后上述改变可得到部分或全部逆转,提示MMP-2表达变化与眼球生长发育密切相关,极可能为FDM后极部巩膜重塑的始发原因之一。
关键词 形觉剥夺性近视眼;基质金属蛋白酶-2;基因表达;巩膜
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